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病理檢測

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免疫組化(IHC)
石蠟切片免疫組化(不含一抗)
貨號:PR-004136
規(guī)格:片
品牌:
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單價:

? 服務(wù)介紹

免疫組化,是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理——抗原抗體反應(yīng),即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì)),對其進(jìn)行定位、定性及定量的研究,稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry,IHC)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)(immunocytochemistry)免疫組織化學(xué)。

? 服務(wù)介紹

1.采用進(jìn)口abcam、CST、Santa、omnimabs抗體;
2.具有多年免疫組化實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn);
3.可免費(fèi)使用我司細(xì)胞庫、組織庫已有細(xì)胞或石蠟切片,無需購買;
4.提供完整的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及實(shí)驗(yàn)報告(包括實(shí)驗(yàn)儀器、試劑、方法步驟、結(jié)果、數(shù)據(jù)分析、結(jié)論等)。

? 實(shí)驗(yàn)流程


客戶提供:新鮮樣本/固定后的樣本/包埋后的蠟塊/切片和一抗,新鮮樣本干冰運(yùn)輸;固定液樣本、蠟塊常溫運(yùn)輸;石蠟切片、細(xì)胞爬片、組織芯片冰袋運(yùn)輸;冰凍切片冰袋+干冰運(yùn)輸;抗體冰袋運(yùn)輸。

? 實(shí)驗(yàn)步驟

1.石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ 5min-二甲苯Ⅱ 5min-二甲苯 II5min-無水乙醇 1min-95%乙醇 1min-85%乙醇 1min-75%乙醇 1min-65%乙醇 1min,自來水洗。
2.抗原修復(fù):將 EDTA 抗原修復(fù)液(PH9.0)用蒸餾水稀釋 50 倍,并加熱至沸騰。將脫蠟水化后的切片置于耐高溫染色架上,放入不銹鋼鍋中;將功率調(diào)至最小(處于保溫狀態(tài)),蓋上鍋蓋,繼續(xù)加熱 20 分鐘后,離開熱源,自然冷卻 10 分鐘;用自來水沖淋不銹鋼鍋外壁使之冷卻,待鍋中液體冷卻至室溫后取出切片;蒸餾水沖洗 3 分鐘x3 次;用 PBS 溶液沖洗 3 分鐘 x3 次;
3.滅活:除去 PBS,在切片上滴加內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑,室溫下孵育 10 分鐘,用PBS 溶液沖洗 3 分鐘 x3 次;
4.封閉:除去 PBS,在切片上滴加 5%BSA 封閉液室溫下孵育 30min;
5.加一抗:輕輕甩掉封閉液,切片上滴加第一抗體,室溫孵育 1h,PBS 沖洗 3x3 分鐘;
6.加二抗:除去 PBS,切片上滴加與一抗相應(yīng)種屬的二抗(HRP 標(biāo)記),室溫下孵育30 分鐘,PBS 沖洗 3x3 分鐘;
7.DAB 顯色:除去 PBS,切片上滴加新鮮配制的 DAB 顯色試劑顯色(5min),顯微鏡下控制顯色時間,陽性為棕黃色, 自來水沖洗切片終止顯色。
8.復(fù)染細(xì)胞核:蘇木素復(fù)染 5min 左右,自來水洗,1%鹽酸乙醇分化數(shù)秒,自來水沖洗, 1%氨水返藍(lán),自來水沖洗。
9.脫水封片:將切片依次放入 65%乙醇 1min-75%乙醇 1min-85%乙醇 1min -95%乙醇-無水乙醇 1min -二甲苯Ⅰ 5min 中脫水透明,將切片從二甲苯拿出來稍晾干,中性樹膠封片。
10.顯微鏡鏡檢,圖像采集分析。結(jié)果觀察: 蘇木素染細(xì)胞核為藍(lán)色,DAB 顯出的陽性表達(dá)為棕黃色

? 結(jié)果展示
小鼠腸ki67-20×

小鼠腦ki67-20×

小鼠腎ki67-20×


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